培養(yǎng)基配制及時滅菌的重要性

培養(yǎng)基，是指供給微生物、植物或動物（或組織）生長繁殖的，由不同營養(yǎng)物質(zhì)組合配制而成的營養(yǎng)基質(zhì)。一般有碳源、氮源、無機鹽（包括微量元素）、維生素和水等幾大類物質(zhì)。培養(yǎng)基是提供細胞營養(yǎng)并促使細胞增殖的基礎(chǔ)物質(zhì)，也是細胞生長和繁殖的適宜生存營養(yǎng)環(huán)境。所以，在培養(yǎng)基配制好后需要立即滅菌，大限度減少有效營養(yǎng)成分的流失。

培養(yǎng)基種類很多，根據(jù)配制原料的來源可分為自然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基、半合成培養(yǎng)基；根據(jù)物理狀態(tài)可分為固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基；根據(jù)培養(yǎng)功能可分為基礎(chǔ)培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基、富集培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基等；根據(jù)使用范圍可分為細菌培養(yǎng)基、放線菌培養(yǎng)基、酵母菌培養(yǎng)基、真菌培養(yǎng)基等。

培養(yǎng)基配成后一般需進行性能測試并調(diào)節(jié)pH，還須進行滅菌，通常有高溫滅菌和過濾滅菌。培養(yǎng)基由于富含營養(yǎng)物質(zhì)，易被污染或變質(zhì)。配好后不宜久置，推薦現(xiàn)配現(xiàn)用。

培養(yǎng)基制備過程

1.配料

配方換算→在容器中加入少量蒸餾水→按照配方稱取各種藥品（依次加入）→溶解煮沸

2.溶解

加熱溶解，特別是加有瓊脂的培養(yǎng)基，一定要煮沸，瓊脂的熔解溫度95-97℃ ，且需要邊加熱邊攪拌，推薦老師們使用磁力加熱攪拌器，以防止燒焦并避免操作人員燙傷。

3.調(diào)PH

用1mol鹽酸或1mol氫氧化鈉溶液，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基pH值到所適宜的范圍內(nèi)。

4.過濾

濾紙或棉花進行過濾。（現(xiàn)在以不常見）

5.分裝

一般培養(yǎng)基放在三角瓶、試劑瓶或試管中進行滅菌，待冷卻后使用。有部分特殊培養(yǎng)基，需要滅菌后，靜置冷卻至45-48攝氏度，加入無菌輔料（如脫纖維羊血）。

(1) 液體培養(yǎng)分裝

若作靜置液體培養(yǎng)，則100ml培養(yǎng)基/150ml的三角瓶或125ml旋口瓶。Tuttnauer滅菌器有*的液體滅菌程序，能提高單瓶的有效裝載容積，從而提高培養(yǎng)基的配置數(shù)量，以此在培養(yǎng)基性能測試中，為用戶節(jié)約更多花費。

三角瓶，否則滅菌時培養(yǎng)基沸騰容易污染棉塞，造成染菌；若作搖瓶培養(yǎng)，則15-20ml培養(yǎng)基/250ml的三角瓶，保證通氣良好。

(2) 固體培養(yǎng)基

固體培養(yǎng)基則200ml培養(yǎng)基/250ml的三角瓶或旋口瓶，420ml培養(yǎng)基/500ml旋口瓶，約單瓶的4/5高度；固體斜面培養(yǎng)基一般裝5-6ml，約試管的1/3高度。

6.包扎

分裝好后的三角瓶塞上棉塞，在用牛皮紙將棉塞包裹好，防止滅菌時水份進入把棉塞弄濕。

7.滅菌

按配方上要求的溫度、壓力進行高壓蒸汽滅菌。如果滅菌時溫度不穩(wěn)定，會造成營養(yǎng)成分被高溫分解，培養(yǎng)基中的碳源、微量氨基酸會使培養(yǎng)基的顏色變深，造成同種培養(yǎng)基不同批次的顏色各不相同。這時培養(yǎng)基性能測試報告該如何完成，廢棄成本高昂，繼續(xù)使用影響測試結(jié)論怎么辦？用Tuttnauer滅菌器，能為您提供的溫度控制，從根本上解決您的煩惱。

8.擺斜面

滅菌后需要擺斜面的試管要趁熱斜著擺放，使其凝固成為一個斜面，約占試管長度的2/3。

9.貯存

固體培養(yǎng)基帶凝固后和液體培養(yǎng)基冷卻至室溫存放于2-8℃冰箱中備用。

10.培養(yǎng)基性能測試

不管什么類型的培養(yǎng)基，都需要進行培養(yǎng)基性能測試。目的有二，一是確保高壓滅菌后的培養(yǎng)基是*無菌的；二是確保培養(yǎng)基營養(yǎng)成分能使細胞或微生物能健康生長。一個完整的培養(yǎng)基性能測試，應(yīng)該包括陽性生長測試、陰性菌生長測試和無菌性能測試。

培養(yǎng)基配制好后為什么必須立即滅菌？

大家都知道，培養(yǎng)基是供微生物生長、繁殖、代謝的混合養(yǎng)料。由于微生物具有不同的營養(yǎng)類型，對營養(yǎng)物質(zhì)的要求也各不相同，加之實驗和研究的目的不同，所以培養(yǎng)基的種類很多，使用的原料也各有差異。為了達到實驗和研究的目的，要按照培養(yǎng)基的配方進行配制。而任何一種培養(yǎng)基制成后應(yīng)及時*滅菌，以備培養(yǎng)使用。一般培養(yǎng)基的滅菌采用高壓蒸汽滅菌。

發(fā)酵過程中，培養(yǎng)基滅菌主要有以下幾個原因：如不滅菌或滅菌不*，會使生物反應(yīng)的基質(zhì)或產(chǎn)物，會因環(huán)境菌的生長而消耗營養(yǎng)物質(zhì)，造成生產(chǎn)能力的下降；環(huán)境菌會產(chǎn)生代謝產(chǎn)物，這就會特定產(chǎn)物的提取更加困難，造成提純率降低，產(chǎn)品質(zhì)量下降；環(huán)境菌大量繁殖后，會改變反應(yīng)液的pH值，使反應(yīng)異常；有些環(huán)境菌會分解產(chǎn)物，使生產(chǎn)失敗；如果發(fā)生噬菌體污染，生產(chǎn)菌細胞將被裂解，使生產(chǎn)失敗。

培養(yǎng)基滅菌是殺滅培養(yǎng)基中本身的原宿菌群或在空氣中附著的環(huán)境菌，更好的讓目標菌生長(減少環(huán)境菌消耗培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質(zhì)，而且有些環(huán)境菌生長使會產(chǎn)生抑制目標菌生長的特殊產(chǎn)物)。一般人工培養(yǎng)細胞或細菌，基本上是盡可能讓其生長快速或者產(chǎn)生代謝產(chǎn)物，因此就讓其在適培養(yǎng)基上生長，以縮短培養(yǎng)時間與提高經(jīng)濟效益。其中，在生產(chǎn)前進行培養(yǎng)基性能測試的意義，直觀的顯現(xiàn)就是避免，生產(chǎn)成本的浪費，簡言之就是以小博大。

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